PGD ​​ו PGS: הקרנה גנטית לפני הפריה חוץ גופית

Preimplantation גנטי הקרנה כדי למנוע מחלות & לשפר את ההצלחה IVF

טכנולוגיות סינון גנטיות כמו PGD ו- PGS, בשילוב עם טיפול ב- IVF , אפשרו לצמצם את הסיכון למחלות גנטיות הרסניות, אולי להפחית את הסיכון להפלה חוזרת, ואולי לשפר את הסיכוי להצלחה בהריון .

כמו בכל טכנולוגיות הרבייה המסייעות, חשוב שתבינו אילו מצבים הטכנולוגיה מיטיבה להשתמש בהם, את הסיכונים האפשריים, את העלויות ואת מה לצפות במהלך הטיפול.

אתה עשוי לראות את ראשי תיבות PGD ו PGS בשימוש לסירוגין. הם שניהם טכנולוגיות ההקרנה הגנטית ושניהם דורשים IVF, אבל הם שונים מאוד מדוע וכיצד הם משמשים.

מה פירוש PGD?

PGD ​​מייצג "אבחון גנטי לפני ההשתלה". מילת המפתח כאן היא "אבחון".

PGS משמש כאשר ספציפי מאוד (או קבוצה של ספציפית) מחלה גנטית צריך להיות מזוהה בעובר . זה עשוי להיות הרצוי כדי למנוע עובר על מחלה גנטית או להשתמש כדי לבחור נטייה גנטית ספציפית מאוד. לפעמים, שניהם נדרשים - לדוגמה, כאשר זוג רוצה להרות ילד שיכול להיות התאמה להשתלת תא גזע עבור אח, אבל גם רוצה למנוע עובר על הגן הגורם למחלה הדורשת השתלת תא גזע.

PGD ​​אינו בודק עובר יחיד עבור כל מחלה גנטית אפשרית. זה חשוב להבין. כך, למשל, אם אין לעובר גן של סיסטיק פיברוזיס (CF), זה לא אומר לך שום דבר על כל מחלה גנטית אחרת שיכולה להיות נוכחת.

זה רק נותן לך ביטחון כי CF הוא מאוד לא סביר.

מה זה PGS מתכוון?

PGS מייצג "Premplantation גנטי ההקרנה". PGS אינו מחפש גנים ספציפיים, אלא מסתכל על הכרומוזומלית הכוללת של העובר.

עוברים יכולים להיות מאוד מסווגים להיות euploidy או aneuploidy . במצב נורמלי, הביצה תורמת 23 כרומוזומים והזרע עוד 23.

יחד, הם יוצרים עובר בריא עם 46 כרומוזומים. זה נקרא העובר euploid.

עם זאת, אם עובר יש כרומוזום נוסף - או חסר כרומוזום - זה נקרא aneuploidy. עוברים aneuploidy נוטים יותר להיכשל להשתיל או לסיים בהפלה. אם ההשתלה, ההיריון והלידה מתרחשים, עוברי אנפולואידים עלולים לגרום לילד עם מוגבלות נפשית או פיזית.

לדוגמה, תסמונת דאון יכולה להתרחש כאשר יש עותק נוסף של כרומוזום 18 או 21. PGS יכול לזהות את זה לפני העובר מועבר הרחם. במקרים מסוימים, PGS יכול לזהות את המין הגנטי של העובר.

הקרנת כרומוזום מקיפה (CCS) היא טכניקה אחת של PGS שיכולה לזהות אם העובר הוא XX (נקבה) או XY (זכר). ניתן להשתמש בו כדי למנוע הפרעה גנטית בין המינים או (לעתים רחוקות יותר) לאיזון משפחתי.

כיצד PGD / PGS ו בדיקות טרום לידתי שונות?

הן PGD ו PGS להתרחש במהלך preimplantation . זה בניגוד בדיקות טרום לידתי, שם השתלה כבר התרחשה. בדיקות טרום לידתי יכול להיעשות רק אם ההריון כבר הוקמה.

הדגימה של דגימת הצוואר (CVS) ובדיקת מי השפיר יכולה לזהות חריגות כרומוזומליות בעובר שטרם נולד. כאשר חשד ליקויים במהלך בדיקות טרום לידתי, האפשרויות הן לאפשר או ההריון להמשיך או לסיים.

זו יכולה להיות החלטה קשה לעשות.

אלו שבוחרים להמשיך את ההריון עומדים בפני אי-ודאות ופחד ממה שיגיע בלידה. מלבד דאגה לגבי ילד עם מוגבלות לכל החיים, הם עלולים להתמודד עם סיכון מוגבר ללידה מת. מי שמחליט להפסיק את ההריון מתמודד עם צער, אולי אשמה, והכאב הפיזי וההחלמה של ההפלה.

כמו כן, יש אנשים שיש להם התנגדות דתית או מוסרית להפסקת הריון, אבל נוח עם בדיקות גנטיות לפני העברת העובר מתרחש. עם זאת, PGD ו PGS אינם מובטחים. רוב הרופאים ממליצים לעשות בדיקות טרום לידתי בנוסף PGD / PGS, רק במקרה אבחנה גנטית טעה או החמיצו.

סיבות אפשריות לבדיקת אבחון גנטי ספציפי עם IVF

להלן הסיבות האפשריות לכך שהרופא שלך עשוי להמליץ ​​על PGD (או סיבות לכך שתוכל לבקש זאת).

כדי למנוע העברת מחלה גנטית ספציפית שפועלת במשפחה : זוהי הסיבה הנפוצה ביותר ל- PGD. תלוי אם מחלה גנטית היא אוטוזומלית דומיננטית או רצסיבית, הסיכון להעברת הפרעה גנטית לילד עשוי להיות בין 25 ל -50 אחוזים.

במקרים מסוימים, זוג לא יכול אחרת צריך IVF להיכנס להריון, ולא יכול להיות מול פוריות. הסיבה היחידה שלהם לרדיפת IVF עשויה להיות בדיקת PGD.

כאמור, בדיקות טרום לידתיות יכולות גם לבדוק מחלות גנטיות, ללא תוספת הוצאות, סיכונים ועלויות הטיפול ב- IVF. אבל מאז האופציה היחידה היא הפסקת הריון (או המשך ההריון) לאחר בדיקות טרום לידתי, זה לא מקובל על זוגות מסוימים.

ישנם מאות מחלות גנטיות שניתן לבדוק אותן, אך חלק מהמקרים הנפוצים ביותר הן:

כדי לסדר טרנסלוקציה או סידורים כרומוזומליים : כמה אנשים נולדים עם כל 46 כרומוזומים, אבל אחד או יותר הם לא במצב הצפוי. אנשים אלה עשויים להיות בריאים לחלוטין, אך הסיכון שלהם לחוות פוריות, לאחר הריון לגרום הפלה או עדיין הלידה, או שיש ילד עם הפרעה כרומוזומלית גבוה מהממוצע.

עבור זוגות שיש להם שותף עם טרנסלוקציה , PGD יכול לשמש כדי לעזור לזהות את העוברים סביר יותר להיות בריאים.

עבור התאמת לויקוציטים אנושיים (HLA), עבור השתלת תאי גזע: השתלת תאי גזע היא התרופה היחידה למחלות דם מסוימות. מציאת התאמה בתוך המשפחה לא תמיד קל. עם זאת, PGD ניתן להשתמש כדי לבחור עובר כי שניהם יהיה התא גזע התאמת (HLA התאמה) ואולי כדי למנוע לעבור על אותה מחלה גנטית המשפיעה על אחות.

אם ניתן לזהות עוברי שהוא גם התאמת HLA, וגם הריון ולידה בריאה מתקיימים, תאי הגזע הדרושים להצלת חיי האחים ניתנים לאיסוף מדם חבל הטבור בעת הלידה.

כדי למנוע מעבר של נטייה גנטית למחלה שמתבגרת למבוגרים : שימוש קצת יותר שנוי במחלוקת ב- PGD הוא להימנע מעברת נטיות גנטיות העלולות לגרום למחלה בשלב מאוחר יותר בחיים.

לדוגמה, הגן BRCA-1 לסרטן השד. גן זה לא אומר אדם בהחלט לפתח סרטן השד, אבל הסיכון שלהם גבוה יותר. PGD ​​יכול לשמש כדי להציג עוברי עבור גרסת BRCA-1. דוגמאות נוספות כוללות מחלת הנטינגטון ומחלת אלצהיימר מוקדמת.

סיבות אפשריות להקרנה גנטית כללית (PGS / CCS) עם IVF

הנה כמה סיבות נפוצות לשימוש ב- PGS עם טיפול ב- IVF.

כדי לשפר את הסיכויים להצלחה עם העברת עוברים בודדים בחירה : מספר מחקרים מצאו כי PGS יכול לעזור לשפר את הסיכויים של ההריון ולהפחית את הסיכון של הפלה, בעת בחירת בחירה יחיד העובר יחיד.

עם העברת העובר יחיד, או eSET , הרופא מעביר רק עובר אחד בריא במהלך הטיפול IVF. זה במקום להעביר שני עוברים בבת אחת, טכניקה אשר מגדילה את הסיכויים להצלחה, אלא גם נושא עמו את הסיכון להרות מכפילים. הריונות מרובים מביאים סיכונים לבריאות האם והתינוקות .

ללא PGS, העובר נבחר באופן מסורתי על פי איך זה נראה. זה נמצא, עם זאת, כי עוברי כי לא נראים מושלם תחת מיקרוסקופ יכול למעשה להיות עדיין בריא. ועוברים כי נראה בריא לא יכול להיות נורמלי כרומוזומלית כפי שהם מופיעים. PGS לוקח כמה ניחושים החוצה.

כדי לזהות מין גנטי : בדרך כלל נעשה שימוש במחלה גנטית על בסיס מגדרי, PGS יכול לסייע בזיהוי אם עובר הוא נקבה או זכר. זה יכול להיות קצת פחות יקר דרך למנוע מחלה גנטית מאשר PGD.

עם זאת, PGS עשוי לשמש גם כדי לעזור לזוג יש ילד של מין מסוים כאשר הם מקווים "לאזן" את המשפחה שלהם. במילים אחרות, יש להם כבר ילד ועכשיו רוצים ילדה, או להיפך. זה היה לעתים נדירות לעשות אם בני הזוג כבר לא דורשים IVF מסיבה אחרת.

למעשה, ASRM ו הקולג 'האמריקאי של מיילדות וגניקולוגים (ACOG) הם מבחינה אתית נגד שימוש PGS לבחירת מגדר ללא סיבה רפואית.

כדי להפחית את הסיכון להפלה אצל נשים עם היסטוריה של אובדן הריון חוזר : הפלה שכיחה, המתרחשת עד 25% מההריונות. הפלה חוזרת ונשנית - שלושה או יותר הפסדים ברציפות - לא. PGS ניתן להשתמש כדי לעזור להפחית את הסיכויים של הפלה אחרת.

המחקר על האם PGS יכול באמת לשפר את הסיכויים להריון עבור נשים עם היסטוריה של אובדן הריון חוזר לא ברור. עבור זוגות שיש להם שותף עם טרנסלוקציה כרומוזומלית, או מחלה גנטית ספציפית המגבירה את הסיכון להפסד הריון או ללידה מת, PGD (לא PGS) עשוי להיות הגיוני.

עם זאת, עבור זוגות אשר ההפסדים אינם קשורים נטייה גנטית ספציפית להפסד הריון, אם IVF עם PGS באמת יכול להגדיל את הסיכויים של לידת חי יותר מאשר להמשיך לנסות באופן טבעי אינו ברור. ייתכן שיש סיכון נמוך יותר לחוות הפלה, אבל הריון בריא ולידה לא יכול לבוא מוקדם יותר.

נכון לעכשיו, האגודה האמריקאית לרפואת פוריות אינה ממליצה על הפריה חוץ גופית עם PGS לטיפול בהפלות חוזרות.

כדי לשפר את הסיכויים להצלחת ההיריון בחולים עם הפריה חוץ גופית : חלק מהרופאים פוריות ממליצים על PGS יחד עם הפריה חוץ גופית כדי להגדיל באופן תיאורטי את הסיכויים להצלחה בטיפול במקרים של אי פוריות גברי קשה, זוגות שחוו אי ספיקת השתלה חוזרת של IVF, או נשים בגיל האם . חלק מהמרפאות מציעות PGS עם IVF לכל החולים.

כרגע יש מעט מחקר כדי להראות כי PGS יהיה באמת לשפר את ההצלחה טיפול IVF כאשר זה לא צוין במפורש. מחקרים רבים אשר מצאו שיעורי הצלחה גבוהים יותר מסתכלים על שיעור לידות חי בכל העברת עובר - ולא לכל מחזור. זה תמיד יהיה גבוה יותר לכל שיעורי מחזור, כי לא כל מחזור IVF מקבל עוברים להעביר. קשה להבחין אם יש יתרון אמיתי. יש צורך במחקרים נוספים.

איך עוברים ביופסיה?

כדי לעשות כל בדיקה גנטית, תאים מן העובר חייב להיות ביופסיה. פלוסידה זונה היא פגז מגן העוטף את העובר. שכבת מגן זו יש לשבור כדי ביופסיה כמה תאים. כדי לפרוץ, אמבריולוג יכול להשתמש לייזר, חומצה, או מחט זכוכית.

לאחר פתיחת זעירה, התאים להיבדק יוסרו או עם יניקה דרך פיפטה, או העובר הוא עדין לחצה עד כמה תאים לצאת דרך פתח שבור.

ביופסיה של העובר עשויה להיעשות שלושה ימים לאחר ההפריה או חמישה ימים. ישנם יתרונות וחסרונות לכל.

יום 3 עוברי ביופסיה : עובר ביום 3 ידוע בשם blastomere. יש רק שישה עד תשעה תאים. אפשר לעשות בדיקות גנטיות על תא אחד בלבד, אבל לקחת שני זה טוב יותר.

אחד היתרונות הגדולים ביותר של עושה ביופסיה יום 3 הוא בדיקה ניתן לעשות בזמן העברת עובר טרי על יום 5 לכתוב ביצה אחזור. פירוש הדבר זמן המתנה פחות עלות נמוכה יותר (שכן ייתכן שלא צריך לשלם עבור העברת עובר קפוא.)

עם זאת, כמה מחקרים מצאו כי ביופסיה של יותר מתא אחד בשלב זה מעלה את הסיכון של "מעצר העובר". העובר עלול להפסיק לפתח ולא ניתן עוד להעביר. זה נדיר, אבל עדיין הסיכון לשקול. כמו כן, הסיכון של תוצאות חיוביות שגויות ותוצאות כולל יותר עם ביופסיה יום 3.

יום 5 עוברי ביופסיה : יום 5 העובר נקרא בלסטוציסט. בשלב זה, העובר יש מאות תאים. כמה תאים אלה יהפכו את העובר, אחרים השליה. האמבריולוג יכול לקחת יותר תאים לבדיקה - בדרך כלל לוקח בין 5 ל 8 - אשר יכול לאפשר לאבחון טוב יותר תוצאות פחות חד משמעיות. התאים שנלקחו הם אלה שנועדו להיות שליה; תאי העובר נותרים ללא פגע.

החיסרון של ביופסיה של יום 5 הוא שלא כל העוברים שורדים בסביבת המעבדה במשך כל כך הרבה ימים, אפילו עוברים בריאים אחרים.

כמו כן, יום ביופסיה 5 דורש את העוברים להיות cryopreserved עד התוצאות לחזור. משמעות הדבר היא שהאישה תצטרך לחכות עד לפחות בחודש הבא כדי לבצע את העברת העובר. זה יהיה מחזור העברת עובר קפוא. משמעות הדבר היא זמן המתנה נוסף ועלויות נוספות. קיים גם סיכון שהעוברים לא ישרודו בהקפאה ובהפשרה.

עם זאת, רק את העוברים החזקים נוטים להישאר לאחר תהליך זה. אלה לשרוד יש תוצאות טובות PGS הם אפילו סביר יותר להוביל לתוצאה בריאה.

מה זה תהליך הפריה חוץ גופית עם PGD ו PGS?

ישנם כמה הבדלים איך מחזור הפריה חוץ גופית הולך על בדיקות PGD או PGS.

קודם כל, עם PGD, התהליך עשוי להתחיל חודשים לפני הטיפול בפועל IVF. בהתאם לאבחנה הגנטית הספציפית הנדרשת, יתכן ויש צורך בבדיקות גנטיות של בני משפחה. זה נחוץ כדי ליצור בדיקה גנטית, שהוא סוג של כמו מפה המשמשת כדי לאתר בדיוק היכן הוא אבנורמליות גנטית או סמן.

PGS אינו דורש בדיקה גנטית של בני משפחה ורק כרוך בדיקות עוברי. במהלך מחזור IVF בפועל, החוויה של המטופל PGS ו PGD דומים, למרות הטכנולוגיה הגנטית המתרחשת במעבדה שונה. אם אתה עדיין לא מכיר את הטיפול ב- IVF המקובל, קרא את ההסבר שלב אחר שלב .

איפה IVF עם ההקרנה הגנטית שונה מן הטיפול המקובל הוא בשלב העובר. בדרך כלל, לאחר ההפריה, כל עוברי בריא נחשבים להעברה שלושה או חמישה ימים לאחר אחזור הביצים. עם PGS או PGD, העוברים הם ביופסיה ביום 3 (לאחר אחזור ביצים) או ביום 5. התאים נשלחים לבדיקה. אם העוברים נבדקים ביום 3, התוצאות עשויות לחזור לפני יום 5. אם כן, כל עוברי עם תוצאות טובות יכול להיחשב להעברה כי מחזור. עוברים נוספים ניתן cryopreserved עבור מחזור נוסף.

עם זאת, כאמור לעיל (בסעיף על ביופסיה העובר), יום 5 ביופסיה עשוי להיות מומלץ או מועדף. במקרה זה, העוברים הם ביופסיה ולאחר מכן cryopreserved מיד. לא יעברו עוברי מחזור IVF במקרה זה. במקום זאת, הם יישארו "על הקרח" עד שתוצאות הבדיקה הגנטית יחזרו.

לאחר תוצאות זמינות, בהנחה כל העוברים נחשבים להעברה, האישה ייקח תרופות כדי לדכא ביוץ ולהכין את הרחם להשתלה. בזמן הנכון, אחד או כמה עוברי יהיה מופשר ומוכנים להעברה.

כאשר בוחרים ביופסיה של יום 5 ומעבר קפוא להעברת עוברי, זמן הטיפול עשוי להימשך בין שניים לארבעה חודשים (עם תקופת מנוחה / תקופת המתנה אפשרית).

סיכונים של PGD / PGS

IVF עם PGS ו PGD מגיע עם כל הסיכונים של טיפול IVF קונבנציונלי.

בנוסף לסיכונים אלה, כל מי שמתבונן ב- PGD / PGS צריך להבין גם את הסיכונים הנוספים הבאים:

כמה עולה PGS / PGD עלות?

IVF כבר יקר. הוספת על עלות PGS או PGD מעלה את תג המחיר אפילו גבוה יותר. בממוצע, PGD / PGD מוסיפה בין 3,000 ל -7,000 לטיפול ב- IVF. העלויות עבור מחזור IVF אחד עם PGS / PGD עשויות להיות בין 17,000 ל -25,000.

נוסף על כך, ייתכן שיהיה עליך לשלם עבור העברת עובש קפוא (FET) מחזור. זה יהיה עוד 3,000 $ ל 5,000. לפעמים, חולים רוצים לתכנן את מחזור FET מיד לאחר מחזור IVF. בדרך זו, ברגע התוצאות של ההקרנה הגנטית לחזור, הם יכולים להעביר כל עוברי רגיל מבלי לחכות חודש נוסף.

עם זאת, בעיה אפשרית עם גישה זו היא כי אם אין עוברים נורמלי להעביר, חלק מהעלויות FET היה מבוזבז. כל התרופות פוריות נלקח כדי לדכא הביוץ ולהכין את הרחם להשתלה יילקח ללא סיבה.

מחכה חודש נוסף יכול להיות קשה מבחינה רגשית, אבל עשוי כלכלית הגיוני יותר. עם PGD, ייתכן שיהיה הוצאות מעבר לטיפול פוריות עצמו. PGD ​​דורש לפעמים בדיקה גנטית של בני משפחה, ועלויות אלה לא ייכללו במחיר הצעת המחיר של המרפאה לפריון, וייתכן שלא יכוסו על ידי הביטוח.

מילה מ מאוד

בדיקות גנטיות סייעו למשפחות עם מחלה גנטית או לתרגומים כרומוזומלים יש סיכוי טוב יותר לילד בריא ולהימנע מהעברת מחלות הרסניות. ההקרנה הגנטית סייעה גם לרופאים לשפר את בחירת העוברים במחזורי העברה של עוברים בודדים .

אם PGD / PGS יכול באמת לשפר את שיעורי לידות חי מעבר למצבים אלה אינו ברור. הטכנולוגיה עדיין חדשה למדי ומתפתחת כל הזמן. שימוש ב- PGS כדי לשפר את שיעורי לידות חי ב- IVF כאשר הטכנולוגיה אינה מצוינת במפורש שנוי במחלוקת.

יש הרופאים טוענים לראות הצלחה משופרת, בעוד אחרים השאלה האם זה באמת שווה את העלויות הנוספות ואת הסיכונים. יש הסבורים שיש להציע את זה לכל חולה IVF; אחרים מאמינים כי יש להציע את זה לעתים רחוקות, במקרים ספציפיים מאוד.

זה אפשרי כי PGS יכול לעזור למנוע העברת עוברים כי היה נגמר בהכרח בהפלה. עם זאת, אין זה אומר כי בני הזוג לא היה בסופו של דבר היתה תוצאה בריאה עם ההריון הבא העובר קפוא העברות (FET) מאותו מחזור.

לדוגמה, נניח כמה מקבל שלושה עוברי חזק. נניח שהם עושים PGS ולגלות שני העוברים הם נורמליים. אחד או שניים מועברים, ו נניח הריון מתרחשת במחזור אחד או שניים. עכשיו, נניח כי אותו זוג החליט לא לעשות PGS, ולמקרה להעביר תחילה את העובר עם abnormality הכרומוזומלית. מחזור זה יסתיים בהפלה. אבל עדיין יש להם עובר אחד או שניים ממתינים להפשיר ולהעבירם, והם צפויים לקבל תינוק בריא מאחד העוברים האלה. (במקרה הטוב ביותר, כמובן).

נכון לעכשיו, המחקר אומר את הסיכויים של הלידה לחיות דומים בכל מצב - עם וללא PGS. אבל יש עלות רגשית לחוות הפלה. PGS אינו מבטל את הסיכויים לאובדן - אם כי נראה שזה מצמצם את הסיכון.

רק אתה והרופא שלך יכול להחליט אם IVF עם PGD / PGS מתאים למשפחה שלך. לפני שתחליט, ודא שאתה מבין מדוע הרופא ממליץ על טכנולוגיה זו פוריות מסייעת לך, את סך כל העלויות (כולל cryopreservation ו FET מחזורי), ואת הסיכונים הפוטנציאליים.

> מקורות:

> פורמן EJ1, טאו X, Ferry KM, טיילור D, Treff NR, סקוט RT ג 'וניור "העברת העובר יחיד עם תוצאות מקיפות כרומוזום ההקרנה בשיעורי הריון מתמשכים משופרת ושיעורי ההפלה ירד. ". 2012 אפר; 27 (4): 1217-22. doi: 10.1093 / humrep / des020. Epub 2012 16 בפברואר.

> ועדה בפועל של החברה לטכנולוגיה פוריות בסיוע; הוועדה בפועל של האגודה האמריקנית לרפואה פוריות. "בדיקה גנטית לפני ההשתלה: חוות דעת של ועדת תרגול". פריטי סטריל. 2008 נובמבר 90 (5 ספקים): S136-43. doi: 10.1016 / j.fertnstert/2008.08.062.

> Schattman, Glenn L; שו, קאנגפו. Preimplantation גנטי הקרנה. UpToDate.com.

> Schattman, Glenn L. Preimplantation אבחון גנטי. UpToDate.com.

> D1, Conen E4, דה ריקה M5, דה ווס A6, Delhanty J7, Fiorentino F8, Glyicher N9, Griesinger G10, Grifo J11, Handyside A12, הארפר J7, קוקלי G13, Mastenbroek S14, Meldrum D15 , Mesguer M18, מונוג M18, מונוג M18, מונוג M18, מונטה M18, רונזי L19, רוביו C20, סקוט K21, סקוט R22, סיימון C23, Swain J24, Treff N22, Ubaldi F19, Vassena R25, Vermeesch JR26, Verpoest W6, וולס D27, Geraedts J4. "למה, איך ומתי של PGS 2.0: פרקטיקות הנוכחי וחוות דעת מומחה של מומחים פוריות, ביולוגים מולקולריים, ואמבריולוגים. "מול הומפרוד. 2016 Aug, 22 (8): 845-57. doi: 10.1093 / molehr / gaw034. Epup 2016 יוני 2.